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病理組織標本作製受託サービス　組織室（実験実習機器センター2 1階）内線：2601　　　　　　　 　　 　 　　　　 　　　一覧に戻る
　担当職員：官野（8627）、智内（8628）　副担当： 

病理組織標本作製受託サービス

　FFPEブロック作製、パラフィン切片作製、凍結切片作製、HE染色、特殊染色等の病理組織標本作製を行います。また、本サービスに関連する物品を有償提供いたします。

サービスの案内

1.	FFPEブロック（ホルマリン固定パラフィン包埋ブロック）作製
2.	切片作成（凍結ブロック、FFPEブロック）
	・薄切（未染色標本作製）
3.	表面脱灰（FFPEブロック）
4.	染色
	・hematoxylin-eosin(HE)染色
	・特殊染色
	－elastica van Gieson(エラスチカ・ワンギーソン)染色
	－one-step trichrome(ワンステップ・トリクローム)染色
	－ゴモリトリクローム染色
	－シリウスレッド染色
	－PAS染色
	－オイルレッドO染色（凍結標本のみ）
	－NADH-TR染色（凍結標本のみ）
	・免疫組織化学染色（IHC）
	－凍結組織標本
	－FFPE組織標本
	－条件検討（薄切、HE染色の工程も含む）
5.	物品提供（有償）
	※「病理組織標本作製受託サービス」の利用者に限りご利用いただけます。 提供物品価格表

利用料金

作業工程別料金　※１
FFPEブロック作製	包埋カセット持ち込み 包埋カセット持ち込み無し	１８０円/ブロック ２２０円/ブロック
薄切（未染色標本）※２	FFPEブロック１枚目 FFPEブロック２枚目以降 凍結ブロック１枚目 凍結ブロック２枚目以降	２００円 １００円 ３００円 １５０円
表面脱灰 （FFPEブロック）	FFPEブロック１枚目 FFPEブロック２枚目以降	２５０円/ブロック 　５０円/ブロック
HE染色		２００円/スライド
特殊染色	elastica van Gieson染色 one-step trichrome染色 ゴモリトリクローム染色 シリウスレッド染色 PAS染色 オイルレッドO染色（凍結標本のみ） NADH-TR染色（凍結標本のみ）	５５０円/スライド ５５０円/スライド ５００円/スライド ５００円/スライド ５５０円/スライド ４００円/スライド ４００円/スライド
免疫染色（IHC）	凍結組織標本 FFPE組織標本 条件検討 （標本作製、HE染色の工程も含む）	１６００円/スライド ２２００円/スライド ３００００円/一式

※１	上記料金は各作業工程毎に適用します。
	例１：凍結ブロック１個を２枚薄切し、それぞれを1枚ずつ別の染色希望 　　　薄切（凍結ブロック１枚目）３００円＋ 薄切（凍結ブロック２枚目以降）１５０円 　　　＋ HE染色 ２００円 ＋ オイルレッドO染色 ４００円 = １,０５０円
	例２：FFPEブロック（包埋カセット持ち込み）１個を作製し、薄切した１枚をHE染色希望, 　　　FFPEブロック作製１８０円 ＋ 薄切（FFPEブロック１枚目）２００円 　　　＋ HE染色 ２００円 ＝ ５８０円
※２	各ブロック毎に1枚目の薄切料金をいただきます。

受付方法

・	業務の都合上、サンプルのご提出前にご連絡願います。
	凍結組織　 PHS：8627 / FFPEブロック　 PHS：8628
・	依頼書（Excel）は、当ページからダウンロードいただくか、組織室からお持ちください。
・	サンプルと依頼書を実験実習機器センター(2)　１階「組織室」まで持参してください。
・	スライドグラスについては、染色の種類によりコーティングに違いがあるため講座からの持込といたします。 また、作製した標本の破損を防ぐため、スライドケースや蓋つきマッペ等もお持ちください。
・	ご不明な点がございましたらkiki_tissue@asahikawa-med.ac.jpまでお気軽にご相談ください。

注意事項

1	凍結組織
・	クラックの入っている凍結サンプルは、薄切の仕上がりに影響が出ますことをご了承願います。
・	感染性のあるサンプルにつきましては、当部門にて取り扱いができないため受け付けておりません。
2	FFPE
・	包埋カセット側面に、鉛筆で「所属、苗字」をご記入ください。
・	サンプルは切り出し面を下にして包埋カセットに入れ、70％エタノールに置換し、密閉容器でご提出ください。
・	サンプルが硬組織や石灰化の場合にはEDTAによる脱灰を推奨いたします。

関連情報

1	固定について
	提出した組織の細胞の自己融解を防ぎ、抗原の非働化をいち早く行うために、採取した組織はすばやく固定液に入れてください。 大きな組織は適当な割を入れて、固定液が早く浸透するようにしてください。
	(1)十分量の固定液を使用してください     10%ホルマリンまたは4%PFAであれば、検体の20倍量の固定液が必要とされています。
	(2)狭い容器に詰め込まないでください     検体が変形します。
	(3)大きさは20ｍm四方以下にしてください     ホルマリンの浸透速度は最初の1時間で3.6mm、25時間で18mmとされています。 　＊乾燥や未固定組織へ水洗は、不良標本の原因となります。 　＊固定不良の場合、組織の自己融解や腐敗が生じます。 　＊過固定（長時間固定）は染色性が悪くなります。
2	固定後の処理について
	固定後、組織片を切り出す前に、あらかじめPBSで十分に洗浄し固定液を除いてください。 切り出す厚さは5mm程度にしてください。 カセット内に組織を隙間無く詰めると、パラフィン等の溶剤の入りが悪くなり、染色性も悪くなります。
3	表面脱灰について
	通常、骨や歯などの硬組織は、固定後に脱灰処理を行った後、FFPEブロックを作製します。血管壁、腎臓、肺など、様々な組織で、加齢や各種疾患、炎症などにより石灰化が生じる場合があり、マウスなどの実験動物では、微小な石灰化や硬組織が見落とされ、薄切時に判明することも多々あります。表面脱灰サービスでは、IHC、FISH またはPCRのような技術に対して特定の分子成分を消失しないようエチレンジアミン四酢酸（EDTA）を使用します。 FFPEブロックを、ミクロトームで荒削り、面だし処理の後、24～48時間で標本作製が可能です。
4	染色について
	・hematoxylin-eosin(HE)染色
	組織の形態を観察するために最も一般的な染色方法です。特に、核内のクロマチンや細胞質、間質に生じる微細構造の変化をとらえることに適しています。

核 青紫 胃主細胞、膵腺房細胞、形質細胞、軟骨基質、石灰化小体（カルシウム） 真菌、細菌 淡青紫色～青紫 細胞質、細胞間質、繊維など 淡ピンク～ピンク 皮膚角質層（角化細胞）、パネート細胞の分泌顆粒、好酸球、赤血球 胃壁細胞、ランゲルハンス島A細胞、腎近位尿細管 濃ピンク

	・elastica van Gieson(エラスチカ・ワンギーソン)染色
	弾性線維、膠原線維、筋線維を染め分ける染色です。血管壁の障害、肺線維症、心筋梗塞、肝硬変や腎不全における線維増生の確認や悪性細胞による脈管侵襲の深達度など、多くの臓器で病態の把握に利用されます。

弾性繊維（肺・血管中膜・黄色靱帯） 黒～紫黒色 膠原繊維（皮膚・血管外膜・骨・軟骨・腱・靱帯） 赤 筋繊維、赤血球、細胞質など 黄 核 黒褐色

	・one-step trichrome(ワンステップ・トリクローム)染色法
	膠原繊維や糸球体基底膜などを染色することにより、肝硬変症、心筋梗塞や間質性肺炎における膠原繊維の増生や、糸球体腎炎における糸球体基底膜やメサンギウム基質の変化確認に用いられます。 　※染色試薬の違いにより色合いは異なりますが、染色結果はMasson trichrome染色と同様です。

膠原繊維（皮膚・血管外膜・骨・軟骨・腱・靱帯） 細網繊維（肝・リンパ節・脾・胸腺・骨髄）、糸球体基底膜、 硝子様物質、粘液、細胞内好塩基性顆粒 青緑 赤血球、筋繊維、細胞質、繊維素、細胞内好酸性顆粒 赤 核 黒紫色

	・ゴモリトリクローム染色
	筋線維、膠原繊維（コラーゲン）、細胞核の染色ならびに特定に使用します。 骨格筋、心筋、または平滑筋の対比染色にも使用可能です。

核 青紫 膠原繊維 青緑 赤血球、繊維素、細胞質、筋 赤

	・シリウスレッド染色
	組織切片中のコラーゲン線維を特異的に染色し、その量を可視化・定量するために用いられ、疾患モデルや組織損傷における線維化の進行度を、評価可能な染色法です。特に、偏光顕微鏡下で観察することで、コラーゲン線維が持つ複屈折性によって、その構造（太さ、配向など）を詳細に観察することができ、I型およびIII型コラーゲンを明確に区別して可視化できるという点が、その最大の利点です。

膠原繊維（Ⅰ・Ⅲ型コラーゲン） 赤 筋線維、細胞質 黄

	・PAS染色
	組織内の多糖類（グリコーゲン、ムコ多糖類など）を赤紫色に染める染色法です。 病理診断では、白血病細胞の鑑別、腎臓の病変観察、真菌の検出などに利用されます。

グリコーゲン、糖蛋白（酸性・中性粘液）、糖脂質、細網線維、刷子縁、 基底膜、甲状腺コロイド、軟骨基質（膠原繊維成分）、好中球の顆粒、 不飽和脂肪酸（リポフスチン・セロイド）、アミロイド、 赤痢アメーバ（グリコーゲン）、真菌（単純多糖類）など 赤紫 繊維素、膠原繊維など ピンク 核 青紫

	・オイルレッドO染色　（凍結標本）
	未固定の組織もしくはホルマリン固定（脂肪周囲の蛋白質などの組織成分を固定し脂肪線分の流失を防ぐ）を推奨します。

中性脂肪 赤 核 青紫

	・NADH-TR染色　（凍結標本）
	筋線維のタイプ1線維(濃染）、タイプ2線維(淡染）を分別し、筋原線維の構造異常を見出すのに役立ちます。

	・免疫組織化学染色（IHC）
	免疫染色のご依頼は、最低4枚以上から承っております。 　可能であれば陽性コントロール標本をお持ちください。 　染色条件の検討は条件検討終了後に最低1０枚以上の免疫染色をご依頼いただく場合に限り承ります。 　　本検討には、標本作製およびHE染色の工程も含まれております。 　※染色結果の最終判断は、依頼者様ご自身でご確認・ご判断をお願いいたします。 　※お持ちいただく抗体のメーカーやロットによっては染色結果が得られない場合がありますのでご了承ください。 　※サンプル提出時にコーティングスライドガラス、スライドケースをお持ちください。 　　受託サービスご依頼時に限り、当センター取り扱いのスライドガラス、スライドケースも有償提供できます。
	受付方法 　　下記依頼書をご提出ください。 　　・凍結組織標本 依頼書・記入例（Excel） 　　・FFPE組織標本 依頼書・記入例（Excel）